Sterilizálás

Sterilizálás

(Cli hlt cikke)

Tartalomjegyzék

  • 1 Sterilizálás
    • 1.1 Hővel
    • 1.2 Vegyszerekkel
    • 1.3 Sugárzássa
    • 1.4 Szüréssel
  • 2 Táptalajok sterilizálása
    • 2.1 PF süti
    • 2.2 Szemes gabonák
    • 2.3 Szubsztrátok
  • 3 Eszközök és a közvetlen környezet sterilizálása
Sterilizálás bármely olyan eljárás, amely felületek, tárgyak, szerszámok, táptalajok, stb. mikróbáktól (baktériumok, gombák, vírusok, ezek esetleges spórái) való megtisztítását célozza. A sterilizálás végrehajtható sok különböző módszerrel: hővel, vegyszerekkel, ionizáló sugárzással, vagy szűréssel.

Hővel

180px-KuktagozA magas hőmérséklet elpusztítja az élő organizmusokat, esetleg a spóráikat is. 100 fokon a spórák nem pusztulnak el teljesen, ehhez autokláv (tulajdonképpen egy nagy kukta), vagy egy szimpla kuktafazék szükséges.

 

Lángolás, izzítás
Fémből készült tárgyakat (tűk, kések, ollók, csipeszek) gyorsan és hatékonyan csíramentesíthetők lángon való átfuttatással, vagy izzásig való hevítéssel. Ez néhány száz fokot jelent, ahol az organizmusok már biztosan elpusztulnak, illetve egyszerűen hamuvá égnek.
Kuktázás
15 psi (1.034 bar, 1kg/cm2 ~1,1 kp/cm2) nyomáson – ami a legtöbb kuktán a 2-es fokozattal van jelölve – a vízgőz hőmérséklete eléri a 121 C°-ot, ezen a legtöbb káros mikroorganizmus és endospóráik is elpusztulnak. Ez történik egy kuktában. Sütőben, szárazon is el könnyen el lehet érni ezt a hőmérsékletet de a gőz segít abban hogy a táptalaj ne száradjon ki és a hőt is jobban közvetíti mint a levegő. A sütővel a gond az, hogy ahol a hökezelni kívánt anyag vízzel érintkezik ott csak 100C-os marad, ahol meg nem ott meg megég.
Arnoldozás (gőzfürdő)
Sterilizálás áramló gőzben (esetleg forró vízfürdőben) 100°C-on 20-30 percig. Ekkor az élő sejtek elpusztulnak, azonban az endospórák egy része életben marad.(Lábasban főzés – kevés vízben.)
Szekvenciális sterilizálás (Tyndallizálás)
Tulajdonképpen három egymást követő arnoldozás, közöttük elég idővel, hogy a túlélő spórák kikeljenek. Ahol nincs kukta ott ez a módszer lehet célravezető,
Pasztörizálás
60-96 C° foknak hosszabb időre kitéve a vegetatív sejtek elpusztulnak (az endospórák viszont túlélik, úgyhogy már közvetlenül a lehűlés után érdemes beoltani, hogy a gomba minél hamarabb elfoglalhassa a táptalajt).

Vegyszerekkel

Denaturált szesz

37267d1352904717-denszeszÉrdemes megemlíteni, hogy a vegyszerek csak direkt kontaktnál fejtik ki hatásukat, azaz ha nem érintkeznek a kártevővel (mert az egy apró résben van ahová a vízcsepp nem tud behatolni), akkor semmit nem érnek, ezért érdemes nem csak felvinni a felületre, hanem bele is dörzsölni, például egy papírtörlő kendővel.

A másik fontos dolog, hogy a vegyszerek maradványai tönkretehetik a gombakultúrát is, ezért a hypót jól le kell öblíteni, az alkoholt pedig megvárni míg teljesen elpárolog.

Alkohol
célszerű denaturált szeszt használni mert olcsó és könnyen hozzá lehet jutni.
Hypo
Jellegzetes szagú, zöldes árnyalatú folyadék. Felületek, eszközök, vagy – vizes permete segítségével – levegő fertőtlenítéséhez használható 1:10, 1:20 arányban. 1:200 arányban a nagygombák micéliumát nem károsítják számottevően. Pasztörizálásra is használják.
Hidrogén-peroxid
Színtelen, szagtalan, erősen oxidáló hatású folyadék. 1.5-3% -os vizes oldatát táptalajok takarórétegének fertőtlenítésére használják, főleg a pókhálós penészgomba visszaszorítására.

Sugárzással

250px-UV-ontsmetting_laminaire-vloeikastBizonyos ionizáló sugárzással szemben a mikroorganizmus nagyon ellenállóak. Az UV fényt azonban nem bírják. Ezért használatos orvosi rendelőkben, műtőkben úgynevezett germicid fénycső, mely veszélyes UV-C fényt bocsát ki. Az UV-C rendkívül veszedelmes, már néhány percnyi, vagy másodpercnyi megvilágítás hatására leéghet a bőr, súlyosan megsérülhet a szem. Légtér és felületek sterilizálására alkalmas, de használata igen nagy körültekintést igényel, ezért körülményes.

Elrettentő példa, egy Daath-os fórumozó esete:[1]

Szűréssel

37268d1352904851-230px-flowhoodHa olyan szűrőn áramoltatjuk át a folyadékot, vagy levegőt, amelynek nyílásai kisebbek, mint a legtöbb mikroorganizmus, akkor szűrés után steril anyagot kapunk. Ezt használja ki az airport technika, ami vatelinnel (polyfillel), vagy tyvekkel működik, és a HEPA filter, ami ma már elengedhetetlen kelléke a nagyüzemi gombatermesztésnek, a glovebox kényelmetlensége nélkül biztosít steril környezetet, az otthoni termesztők számára is. A HEPA filter szó csak a szűrőre utal, ami egy nagy sűrűségű több rétegű szövet, ezen egy nagy teljesítményű ventillátor segítségével áromoltatható át a levegő. Az így kapott immáron megszűrt légáramban végezhetjük steril környezetet igénylő dolgainkat.

Táptalajok sterilizálása

Először a leendő táptalajból kell kiölni mindenféle baktériumot, organizmust, és idegen gombák spóráit, mert ha ezek ottmaradnak elhatalmasodhatnak a termeszteni kívánt gomba felett, bomlásnak indíthatják a táptalajt, vagy épp a gombánkat tekintik majd táptalajnak.
Három típusra lehetne osztani a táptalajokat

  • PF süti típusú, (vermikulit és liszt alapú)
  • Szemes gabonák, (általában búza vagy rozs, zab, de ide lehet venni a kölest és a kukoricát is)
  • Szubsztrátok, (szalma, komposzt, kókuszrost, kukorica csutka, és minden nagyobb mennyiségben használt szerves anyag).

PF süti

37269d1352797471-180px-pfteleA PF sütiket lehet a legkönnyebben csírátlanítani, mivel a vermikulit szervetlen anyag így nincs benne sok kártevő, a liszt pedig kis szemcseméretű így a hő könnyen átjárhatja.
Sterilizálásához még kukta sem kell, elég egy nagyobb lábas, és egy-másfél óra főzés után lehet benne bízni, hogy sterilre sikeredett

Szemes gabonák

37270d1352905021-180px-wetspot1Mivel a gabonaszemek viszonylag nagyok és tömörek, ráadásul természetükből adódóan tömve vannak fertőzésekkel, a sterilizálásukhoz magasabb hő szűkséges amit általában nagy nyomáson kukta segítségével állíthatunk elő. Néhány kártevő betokozódott formában azonban még a magas hőmérsékleteket is túlélheti, ezért ha ebből gondok adódnának érdemes a gabonát előáztatni, hogy az endospóráknak nevezett betokozódott izék is kikeljenek, így már elpusztíthatóvá válnak. Egy napos áztatás vízben általában elegendő ehhez. Bővebben a gabonák cikkben.

Szubsztrátok

37271d1352827663-180px-straw_8Szubsztrátokat ritkán sterilizálják, a pasztörizálás célravezetőbb és gazdaságosabb megoldás. Ezt komposztálással, vagy főzéssel, esetleg gőzöléssel szokták tenni leggyakrabban, de vegy kezelésse, hypós vagy oltott meszes áztatással is elvégezhető. Szalmát például elég pasztörizálni (lásd: szalma), és van aki szerint a kókuszrost ha teljesen sterilizálva volt, sokkal könnyebben elfertőződik mint a pasztörizált.

Eszközök és a közvetlen környezet sterilizálása

Kritikus műveleteknél, amikor a gomba vagy a táptalaj érintkezhet a szabad levegővel, vagy valamilyen eszközzel, célszerű mindent a lehető legsterilebbé varázsolni.

Ilyen kritikus műveletek például az

  • Oltás
  • Transzferek (G2G, spawn)
  • Klónozás, izolálás

Először a munkaterületet kell előkészíteni. Lehetőleg egy kisebb helységről legyen szó (fürdőszoba, szekrény, spájz), amiben a légmozgást, azaz a huzatot le kell csökkenteni a minimumra, hogy a levegővel szálló csúnyaságok minél kisebb utat tehessenek meg a levegőben szállva.

A legjobb, ha a helységben jól tisztítható felületek vannak (csempe, műanyag), és penésznek sehol nincs még nyoma sem.
A munkafelületet és a közvetlen környezetet fertőtleníteni kell 1:10, vagy 1:20, esetleg 1:50 hypós oldattal vagy más fertőtlenítő szerrel, magyarul jól át kell törölgetni mindent hogy megszabaduljunk az ott lapuló kártevőktől.

Ezután kerülhetnek be a művelethez szükséges eszközök, pl. a befőttesüvegek, fecskendők, penge, vagy akármi más amire később szükség lehet.

A légteret is célszerű fertőtleníteni, ezt hipós víz kézi permetezésével vagy légfertőtlenítő spray-vel tehetjük. Az vízpermet cseppjei magukhoz vonzzák a porszemeket, a hipóval érintkezve pedig a rajtuk utazó fertőzések pusztulnak el. Soha ne permetezzünk alkohollal mivel ez robbanáshoz vezethet. A hipóval is vigyázni kell, mert ha olyan felületre kerül – tapéta, szövetek, szőnyeg, szerves anyagok- tönkreteheti azt, és belélegzése is veszélyes lehet ezért maszk használata javasolt.

A légtér megtisztításában segítségünkre lehet még a

  • HEPA filter, ami egy sűrű szűrőn át áramoltatva a levegőt kiszűri a mikroorganizmusokat és a spórákat,
  • Ionizátor hogy mennyire hasznos az kétes, mindenesetre a levegőben szálló porszemeket magához vonzza,
  • Ózon generátor, aminek ózonja nagy mennyiségben megöli a mikroorganizmusokat.

Az utóbbi kettő csak kiegészítő légtisztítóként szolgálhat

A permetezés után zárjuk be az ajtót és hagyjuk magára az objektumot kb 20 percre, hogy a hipó elvégezze dolgát és a permet is lecsapódjon.

Ezt az egész hercehurcát természetesen nem kötelező elvégezni, és célszerű inkább glovebox-ot vagy stillairboxot használni. Spawn-al való oltáskor nyílt levegőn is egész nagy a sikeres, fertőzésmentes kultúrák létrejöttének esélye. Van pár művelet amit csak gloveboxban érdemes végezni, főleg az agar agart is felhasználó, vagy G2G transzfereket, és a klónozást is ide lehetne venni, spórás víz készítésről már nem is beszélve.

37272d1352905259-230px-gloveboxinusegoodGlovebox használata nélkül, nyílt levegőn egy huzat nélküli helységben a műveleteket gyorsan végezve nekem kb

  • 10-50%-os volt a sikeres kultúrák aránya spóraporból vagy termőtestdarabból való LC készítésnél,
  • valamivel jobb termőtestdarab gabonára oltásánál
  • 70-80% G2G-nél és spawnal oltásnál.
  • 90-100% az oltásoknál, -eltekintve egy egyszeri 0%-tól ami abból adódott hogy a gabona nem lett előáztatva ráadásul tavalyi búza volt-

Mindezt levegő fertőtlenítés vagy glovebox nélkül, az eszközöket persze mindenképp sterilizálni kell.

Eszközök sterilizálása

Mindent ami a gombához, vagy a friss táptalajhoz ér sterilizálni kell.

A pengét amivel a klónozni való gombát vágjuk, az oltáshoz használt tűt, a mágneses keverőhöz használt villa fokát érdemes egy borszesz égő vagy öngyújtó lángja felett izzásig hevíteni.

37273d1352797987-180px-pftuAmi nem bírja a hevítést, alkohollal, pl denaturált szesszel fertőtleníthető. Ilyen pl. a tál amiben a klónozandó termőtestek lesznek, a biopsziás tű, merthogy láng sterilizálni ugye nem lehet, mivel a belsejében ott figyelnek a gombadarabkák, és alkoholos papírtörlővel szokás az oltási portokat is megdörzsölni, legyen az szilikon port, vagy egy lyuk az alufólián. Ez érthető is mivel a porton lévő fertőzésekkel érintkezve a tű külsejére tapadva bejuthatnak oltáskor a táptalajba.

(Visited 1,306 times, 1 visits today)
[Total: 4    Average: 2.8/5]

One thought on “Sterilizálás

  1. Visszajelzés: PF-casing | exkalapalatt

Vélemény, hozzászólás?